APANAC - INDICASAT AIP 2016
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NOVEDOSA TECNOLOGÍA DE PUNTA PARA DESARROLLAR CÉLULAS MADRES PLURIPOTENTES INDUCIDAS A PARTIR DE CÉLULAS MADRES DERIVADAS DE TEJIDO ADIPOSO

 

L. Sebástian A. Valerio H., Damaris G. de la Torre D. & Kiminobu Sugaya

 

Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT)

 

Las principales causas de muerte por enfermedad en la república de Panamá son neoplasias, isquemias cardiacas e infarto cerebral. Hasta la fecha no hay cura ni tratamiento efectivo contra estas enfermedades que resultan en la perdida funcional de tejidos vitales. Los más recientes estudios en medicina regenerativa para restaurar la perdida funcional de tejidos, se enfocan en el uso de células madres. Especial interés han recibido las células madres pluripotentes inducidas (iPS cells) por su capacidad de formar cualquier célula especializada de un organismo adulto sin incurrir a dilemas

éticos que enfrentan la contraparte de células madre embrionarias.

En este trabajo, presentamos los pasos iniciales para la adquisición de pluripotencia usando como materia prima células madre derivadas de tejido adiposo (ADSC). La producción de células iPS involucra la reprogramación de células adultas por activación de señales de pluripotencia, incluyendo la inducción de las proteínas de union al ADN embrionario OCT4, nanog y SOX2. Sin embargo, se ha demostrado que modificaciones epigenéticas como la metilación del ADN reduce la potencia de las células y limita la expresión de una variedad de genes por restricción al acceso de otras proteínas de unión al ADN a promotores de estos genes. De esta forma, hipotetizamos que revirtiendo las modificaciones epigenéticas, podríamos incrementar la accesibilidad a proteínas de union a ADN embrionarias para incrementar la eficiencia de reprogramación de células adultas a células pluripotentes inducidas.

Nuestra metodología comienza con la recolección de tejido adiposo descartado de procedimientos de liposucción de voluntarios que acuerden dar su consentimiento informado. Después se procede con la aislación, expansión y crio preservación de las células madre adiposas. Nosotros identificamos a las ADSC por la adhesión a platos de plástico de cultivo celular y morfología tipo fibroblástica, que expresen biomarcadores positivos CD105, CD90 y CD73, y biomarcadores negativos CD45.

Finalmente se procede con la inserción de factores de pluripotencia por transfección. Nosotros usamos un plásmido que incluye la proteína verde fluorescente como gen

reportero y los genes OCT4, SOX2 y nanog.

Nuestros resultados muestran biomarcadores positivos de ADSC, adhesión a platos de plástico de cultivo celular y morfología tipo fibroblástica. Un procedimiento de electroporación resulta en células fluoresciendo color verde, indicando que los factores pluripotentes son insertados a las ADSC con relativa alta eficiencia.

Esperamos que con el desarro-llo de esta novedosa tecnología de punta podamos estudiar, modelar y atacar las principales causas de enfermedad de la población panameña.

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