APANAC - INDICASAT AIP 2016

DESARROLLO DE UN ENSAYO COLORIMÉTRICO PARA  LA IDENTIFICACIÓN DE MOLÉCULAS COMO POTENCIALES  TERAPÉUTICOS DE LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER

 

D Doens 1,2, L Carreño 3, O Larionov 4, R Lleonart 1, P L Fernandez 1

 

1. Centro de Biología Molecular y Celular de Enfermedades, Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT-AIP), 2. Departamento de Biotecnología, Universidad Acharya Nagarjuna, 3. Facultad de Ciencias de la Salud Dr. William C. Gorgas, Universidad Latina de Panamá, 4. Departamento de Química, Universidad de Texas San Antonio

 

La enfermedad de Alzheimer (EA) es la forma más común de demencia, y representa un grave problema de salud pública a nivel mundial. La patogénesis de la EA incluye los depósitos extracelulares de beta amiloide (Aβ), los ovillos neurofibrilares y la neuroinflamación. En años recientes, la relevancia sobre el potencial de la microglia en la activación del sistema inmune en EA ha recibido más atención. La microglia es activada por el Aβ, generando una respuesta proinflamatoria que juega un papel crítico en la patogénesis de EA. El Aβ se une al receptor CD36 y activa la microglia para la producción de citoquinas y neurotoxinas que llevan a la neurodegeneration.

El bloqueo de esta interacción podría ser relevante para la reducción de la respuesta inflamatoria producida por Aβ en el cerebro. Bajo esta premisa, nos propusimos como principal objetivo el diseño y optimización de un ensayo novedoso para el cribado de librerías de compuestos sintéticos capaces de bloquear la interacción de Aβ-CD36. Estudios previos habían identificado al ácido ursólico como un inhibidor de esta interacción, capaz de reducir la generación de especies reactivas de oxígeno por

microglia activada con Aβ. Para el desarrollo de este ensayo se realizó la expresión y purificación del dominio extracelular del CD36 humano recombinante, que fue posteriormente utilizado para cubrir las placas de 96 pocillos. Después de la adición con Aβ fibrilar, el complejo Aβ-CD36 fue detectado utilizando un anticuerpo anti-Aβ seguido por un anticuerpo anti-ratón conjugado con HRP. Los compuestos que interfirieron con la unión del complejo Aβ-CD36 fueron detectados por la reducción de color en la señal colorimétrica. El ácido ursólico fue utilizado como control positivo de la inhibición. Este nuevo ensayo fue utilizado para el cribado de nuevos compuestos sintéticos provenientes de 9 librerías. Un total de 52 compuestos mostraron un efecto en la interacción Aβ- CD36. Los resultados sugieren que este ensayo es prometedor para la detección de moléculas que interfieran con el complejo Aβ-CD36 que puedan ser identificados como potenciales agentes terapéuticos para Alzheimer.

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